2023年4月24日，國家藥典委員會(huì )官網(wǎng)發(fā)布“關(guān)于通則0502 薄層色譜法修訂草案的公示”，擬對2020年版《中國藥典》第四部第59頁(yè)收入的方法——0502 薄層色譜法部分內容進(jìn)行修訂，公示期自發(fā)布之日起3個(gè)月。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗技術(shù)，是藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的常用方法之一。
一、了解薄層色譜法常用專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)
1.薄層色譜法（Thin-layer chromatography, 簡(jiǎn)稱(chēng)TLC)：
系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開(kāi)容器內用展開(kāi)劑展開(kāi)，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的標準物質(zhì)按同法所得的色譜圖對比，亦可用薄層色譜掃描儀進(jìn)行掃描，用于鑒別、檢查或含量測定。
2.薄層色譜掃描法：
系指用一定波長(cháng)的光照射在薄層板上，對薄層色譜中可吸收紫外光或可見(jiàn)光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分數據用于鑒別、檢查或含量測定。可根據不同薄層色譜掃描儀的結構特點(diǎn)，按照規定方式掃描測定，一般選擇反射方式，采用吸收法或熒光法。除另有規定外，含量測定應使用市售薄層板。
3.比移值（Rf）：
系指從基線(xiàn)至展開(kāi)斑點(diǎn)中心的距離與從基線(xiàn)至展開(kāi)劑前沿的距離的比值。
二、常見(jiàn)的薄層色譜法儀器，你認識幾種？
在藥品檢測領(lǐng)域，有“四大名譜”，它們分別為色譜、光譜、質(zhì)譜、波譜，可以說(shuō)只要有分析任務(wù)的地方都在使用色譜分析法，薄層色譜法（ TLC）因其操作簡(jiǎn)單、成本低廉、靈敏度高、分離速度快、可同時(shí)分析多個(gè)樣品而成為目前應用最廣泛的分離技術(shù)之一，常見(jiàn)的薄層色譜法儀器分別是：
1)薄層板：按支持物的材質(zhì)分為玻璃板、塑料板或鋁板等；按固定相種類(lèi)分為硅膠薄層板、鍵合硅膠板、微晶纖維素薄層板、聚酰胺薄層板、氧化鋁薄層板等。
2)點(diǎn)樣器： 一般采用微升毛細管或手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器材。
3)展開(kāi)容器：上行展開(kāi)一般可用適合薄層板大小的專(zhuān)用平底或雙槽展開(kāi)缸，展開(kāi)時(shí)須能密閉。水平展開(kāi)用專(zhuān)用的水平展開(kāi)槽。
4)顯色裝置：噴霧顯色應使用玻璃噴霧瓶或專(zhuān)用噴霧器，要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細霧狀噴出；浸漬顯色可用專(zhuān)用玻璃器械或用適宜的展開(kāi)缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽展開(kāi)缸或適宜大小的干燥器代替。
5)檢視裝置：為裝有可見(jiàn)光、254nm 及 365nm 紫外光光源及相應的濾光片的暗箱，可附加攝像設備供拍攝圖像用。暗箱內光源應有足夠的光照度。
6)薄層色譜掃描儀：系指用一定波長(cháng)的光對薄層板上有吸收的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)，進(jìn)行掃描，將掃描得到的譜圖和積分數據用于物質(zhì)定性或定量的分析儀器。
三、新舊0502 薄層色譜法主要內容搶先看
根據2020年版《中國藥典》實(shí)施以來(lái)的反饋意見(jiàn)，結合各國藥典色譜法通則的修訂變化，此次有以下幾項內容有發(fā)生變化，紅色字體為刪除內容，藍色字體為增訂內容變更主要內容對照如下：
（一）系統適用性試驗——分離度
定量薄層色譜法的分離度是基于兩相鄰峰（斑點(diǎn)）距離和兩相鄰峰的峰寬計算，此次修訂稿中增加了以半高峰寬計算分離度的公式。但考慮各版《中國藥典》的延續性，仍保留原有公式作為過(guò)渡，并明確當有異議時(shí)，分離度（Rs）應以半高峰寬（Wh/2）的計算結果為準，主要修訂內容如下：
(3) 分離度（或稱(chēng)分離效能） 鑒別時(shí)，供試品與標準物質(zhì)色譜中的斑點(diǎn) 均應清晰分離。 當在薄層色譜掃描法用于限量檢查和含量測定時(shí)， 要求定量待測 峰與相鄰峰之間有較 良好的分離度， 兩峰分離度 (Rs ) 的可用下列計算公式為計算：
式中， 
分別為兩峰的比移值， ；
分別為相鄰兩峰與原點(diǎn)的距離， ；
分別為相鄰兩峰的半高峰寬；
分別為相鄰兩峰的峰寬；
a 為展開(kāi)劑遷移(展開(kāi))距離。
除另有規定外，分離度應大于1.0。
當有異議時(shí)，分離度(
)應以半高峰寬(
)的計算結果為準。
式中 d2 為相鄰兩峰中后一峰與原點(diǎn)的距離；
d1 為相鄰兩峰中前一峰與原點(diǎn)的距離；
W1 及 W2 為相鄰兩峰各自的峰寬。
除另有規定外，分離度應大于 1.0 。
在用于化學(xué)藥品雜質(zhì)檢查的方法選擇時(shí)，可將雜質(zhì)對照品用供試品自身稀釋的對照溶液溶解制成混合對照溶液， 也可將雜質(zhì)對照品用待測組分的對照品溶液 溶解制成混合對照標準溶液， 還可將采用供試品以適當的方法降解方法獲得的溶 液作為對照溶液，上述溶液點(diǎn)樣展開(kāi)后的色譜圖中，應顯示清晰分離的斑點(diǎn)。
（二）薄層色譜條件（參數）
根據各國藥典，修訂稿增加了薄層色譜條件（參數）允許調整的內容，并以簡(jiǎn)單示例說(shuō)明如何調整，主要修訂內容如下。
4. 色譜條件調整
品種正文項下規定的色譜條件可作如下調整：
展開(kāi)劑的組成比例： 占比小的組分，可在相對值±30%或絕 對值±2%范圍， 取較大者進(jìn)行調整；其他組分的調整不得過(guò)絕 對值 10%。占比小的組分是指小于 或等于(100/n) %組分， n 是展開(kāi)劑中各組分個(gè)數。當展開(kāi)劑由 3 個(gè)組分組成， 如某組分占比為 10% ，為占比小的組分，其相對值±30%的范圍是 7%~13% ，絕 對值±2%的范圍是 8%~12% ，可在較大的相對值范圍調整。
除另有規定外，展開(kāi)劑中水相組分的 pH 值可在±0.2 pH 單位范圍內調整。 展開(kāi)劑緩沖組分中鹽的濃度可在原規定值±10%范圍內調整。
點(diǎn)樣體積： 如使用 2~10μm 的細顆粒薄層板，可在規定點(diǎn)樣體積的 10%~20%范圍調整。
應評價(jià)色譜條件調整對分離和檢測的影響，必要時(shí)對調整后的方法進(jìn)行確 認。若調整超出上述或品種項下規定的范圍， 將被認為是對方法的修改， 需要進(jìn) 行充分的方法學(xué)驗證。
當對調整色譜條件后的測定結果產(chǎn)生異議時(shí)， 應以品種項下規定的色譜條件 的測定結果為準。
參考文獻
[1]www.chp.org.cn
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