引言：雙特異性抗體（bispecific antibodies, bsAbs）是一類(lèi)能夠同時(shí)靶向兩個(gè)不同抗原表位的治療性抗體。相較于傳統單克隆抗體（mAb），bsAbs在腫瘤免疫治療、自身免疫性疾病和感染性疾病中展現出更高的特異性和更低的副作用風(fēng)險。截至2025年，全球已有14款bsAb藥物獲批上市，另有數百種處于臨床前研究階段。然而，bsAb的復雜結構（圖1）使其下游純化面臨巨大挑戰：
本文將系統解析bsAb純化的核心策略，涵蓋捕獲層析、雜質(zhì)去除技術(shù)及未來(lái)發(fā)展方向，為生物制藥工藝開(kāi)發(fā)提供全面指導。
圖1 | 雙特異性抗體的結構分類(lèi)：對稱(chēng)型與非對稱(chēng)型、IgG樣與非IgG樣結構。
一、捕獲層析：從Protein A到新型技術(shù)
1.1 傳統親和層析：Protein A的黃金標準
Protein A親和層析是bsAb捕獲的核心技術(shù)，其通過(guò)結合抗體的Fc區域實(shí)現高特異性捕獲。近年來(lái)，高載量樹(shù)脂（如MabSelect PrismA）的研發(fā)顯著(zhù)提升了效率：
局限性：
1.2 非Fc依賴(lài)型捕獲技術(shù)
對于缺乏Fc區域的非IgG樣bsAb，需采用輕鏈（LC）靶向親和層析：
1.3 混合模式層析：新一代捕獲方案
混合模式層析結合離子交換、疏水作用等多機制，展現出獨特優(yōu)勢：
創(chuàng )新應用：
圖2 | 典型下游純化流程：捕獲、低pH病毒滅活、精純、病毒過(guò)濾等步驟。
二、產(chǎn)物相關(guān)雜質(zhì)去除策略
2.1 同源二聚體：結構錯配的克星
2.1.1 親和層析差異化捕獲
2.1.2 離子交換層析電荷調控
2.1.3 混合模式層析多維分離
圖3 | 不同親和層析配體的結合位點(diǎn)：Protein A（Fc）、MabSelect PrismA（Fc+VH3）、KappaSelect（κ輕鏈）等。
2.2 片段雜質(zhì)：從半抗體到單臂片段
2.2.1 親和層析精準去除
2.2.2 混合模式層析高效精純
2.3 聚集體：免疫原性的隱形殺手
2.3.1 親和層析洗脫優(yōu)化
2.3.2 混合模式層析多維清除
圖4 | 產(chǎn)物相關(guān)雜質(zhì)類(lèi)型：同源二聚體、半抗體、聚集體等。
三、工藝相關(guān)雜質(zhì)清除技術(shù)
3.1 宿主細胞蛋白（HCP）
3.1.1 層析與深度過(guò)濾聯(lián)用
3.1.2 上游工藝聯(lián)動(dòng)
3.2 病毒安全：從滅活到過(guò)濾
3.2.1 低pH滅活
3.2.2 層析與膜過(guò)濾
3.3 內毒素：電荷差異的利用
四、工藝整合與未來(lái)展望
4.1 經(jīng)典流程 vs 創(chuàng )新模式
圖7 | （A）經(jīng)典流程；（B）混合模式替代離子交換；（C）混合模式替代Protein A。
4.2 技術(shù)前沿：數字化與連續生產(chǎn)
五、結語(yǔ)
雙特異性抗體的下游純化是一場(chǎng)特異性與效率的博弈。從Protein A的黃金標準到混合模式層析的創(chuàng )新突破，從同源二聚體的精準分離到病毒安全的全面保障，每一步技術(shù)進(jìn)步都在推動(dòng)bsAb藥物的臨床轉化。未來(lái)，隨著(zhù)AI與連續生產(chǎn)技術(shù)的深度融合，抗體純化將邁向更高純度、更低成本的智能化時(shí)代。
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