生物體按照蛋白質(zhì)的一級結構，即氨基酸序列，將蛋白質(zhì)折疊和組裝到更高級別的空間構象組織（二級、三級和四級結構）。基于相同的原理，短肽也能夠采取空間二級結構，例如α螺旋和β折疊。

       這些構象通常是由弱的非共價(jià)相互作用驅動(dòng)的，例如靜電相互作用、氫鍵、疏水作用或范德華力。此外，雙親短肽由于肽單體之間的分子間弱相互作用而易于自組裝。化學(xué)的進(jìn)步為分子設計提供了一種程序設計和控制的環(huán)境：本文將重點(diǎn)論述細胞穿透肽（Cell Penetrating Peptides, CPPs）分子設計方面的最新進(jìn)展。

       細胞穿透肽的應用及化學(xué)結構特征

       細胞穿透肽是一類(lèi)長(cháng)約5~30個(gè)氨基酸的短肽，能夠攜帶多肽，核酸，小分子藥物及病毒顆粒穿透細胞膜進(jìn)入細胞。人們用其作為載體，將運載物轉運進(jìn)入細胞。過(guò)去的研究證明，用細胞穿透肽攜帶蛋白質(zhì)和多肽治療癌癥和炎癥性疾病的小鼠模型是有效的。基于動(dòng)物實(shí)驗研究，人們認為細胞穿透肽攜帶DNA或SiRNA治療疾病將成為可能。

       細胞穿透肽還可以提高病毒轉染的效率。因此，對于這種即可幫助治療疾病，又有可能助紂為虐，加速病毒傳播的雙刃劍，人們更需要加大研究力度以趨利避害。另外，細胞穿透肽可以攜帶熒光或放 射性試劑用于成像應用。總之，細胞穿透肽攜帶治療基因或者藥物分子進(jìn)入細胞將有非常廣闊的臨床應用前景。

       細胞穿透肽數據庫于 2012 年建立，由印度 Indraprastha Institue of Information Technology創(chuàng )建，現已更新至2.0 版，對于細胞穿透肽的分子設計具有很強的指導作用。細胞穿透肽數據庫顯示了 1699 個(gè)獨特的細胞穿透肽序列，大多數是直鏈多肽（94.5%）。攜帶分子方面主要用于熒光團的傳遞 (54%) ，與生物醫學(xué)相關(guān)的主要貨物分子是核酸（15%）。其余的貨物分子主要包括蛋白質(zhì) (9%)、生物素（8%）、納米粒子 (7%) 和肽藥物(4%) 。細胞穿透肽的研究主體集中在全L-氨基酸 (84.3%) 構成的合成多肽(54.8%) 。此外，全D-氨基酸組成的細胞穿透肽的內化效率和穩定性，以及由 L- 和 D-氨基酸混合組成的細胞穿透肽，也有相關(guān)的文獻報道。（圖 1）

       圖1. 細胞穿透肽數據圖

       常規的細胞穿透肽的分子設計都繞不開(kāi)以下三個(gè)關(guān)鍵參數：胍基含量（或者陽(yáng)離子氨基酸含量）、疏水性和雙親性。富含精氨酸（精氨酸側鏈為胍基，pKa約為12，在生理pH條件下為質(zhì)子化的胍基陽(yáng)離子）的細胞穿透肽，在一級結構-功效領(lǐng)域經(jīng)受了深入的研究。

       在研究細胞穿透肽的氨基酸序列以及單個(gè)氨基酸殘基（例如正電荷）貢獻方面，膜模型，膜提取物以及體內研究起到非常關(guān)鍵的角色，這些研究都對細胞穿透肽的分子設計起到了指導作用。盡管存在這些理論指導，單從多肽序列預測它的膜穿透性仍然非常困難。

       除了序列之外。多種化學(xué)和物理化學(xué)性質(zhì)，例如電荷、手性、芳香性和疏水性，及其相互作用通常是細胞穿透肽內化的重要驅動(dòng)力。可以說(shuō)，多肽序列是基礎，在這個(gè)基礎之上的分子間的相互作用，決定了細胞穿透肽的功效。要設計出高效的細胞穿透肽，包括電荷、胍基、手性、疏水性和芳香性在內的眾多參數，它們之間的相互作用，需進(jìn)一步的深入研究。

       基于以上考慮，細胞穿透肽的構效關(guān)系和雙親多肽的空間構象得到了充分的研究。電荷與雙親性是細胞穿透肽分子設計時(shí)需要考慮的兩個(gè)主要因素。細胞穿透肽的內化效果會(huì )因雙親性和多陽(yáng)離子的整體特性而發(fā)生變化。除此之外，多肽序列長(cháng)度與空間構象對于多肽內化有著(zhù)與多陽(yáng)離子性同等重要的地位。

       富集陽(yáng)離子對細胞穿透肽的意義

       富含側鏈陽(yáng)離子氨基酸的肽序列在細胞穿透肽領(lǐng)域可謂至關(guān)重要。Tat肽（圖2） 的發(fā)現，是細胞穿透肽領(lǐng)域具有里程碑意義的事件。Tat (反式激活轉錄激活劑, Transactivating transcriptional activator) 肽是人類(lèi)免疫缺陷病毒 (HIV-1)的原始轉錄激活因子中殘基 48 至 60 的肽片段。Tat 改性的基因傳遞系統顯示出增強的跨多個(gè)生物膜（例如細胞膜、內體膜和核膜）的轉運功能。

       圖2. Tat肽化學(xué)結構

       Tat肽包含六個(gè)精氨酸和兩個(gè)賴(lài)氨酸殘基，它們都屬于堿性氨基酸，側鏈分別為胍基和氨基，在生理pH條件下都因質(zhì)子化帶有正電荷。鑒于Tat的重大指導意義，最簡(jiǎn)單的細胞穿透肽模擬物設計為寡聚精氨酸也就不足為奇了。

       細胞穿透肽的內化效果與陽(yáng)離子殘基之間的相關(guān)性已經(jīng)得到了證實(shí)。受到Tat (GRKKRRQRRRPQ) 和滲透素(RQIKIWFQNRRMKWKK) 的啟發(fā)，細胞穿透肽的分子設計主要集中在小的陽(yáng)離子肽（攜帶5個(gè)左右的正電荷），例如聚精氨酸和聚賴(lài)氨酸肽。研究最深入的細胞穿透肽模型，是基于寡精氨酸的R8 和 R9 （8個(gè)或9個(gè)連續精氨酸殘基的多肽，圖3）。

       聚陽(yáng)離子細胞穿透肽的吸收效率取決于序列長(cháng)度以及精氨酸殘基在多肽序列的位置。據報道環(huán)化可最大限度地增加精氨酸與細胞膜之間的作用，從而實(shí)現更高的吸收效率。除了精氨酸側鏈的胍基之外，多肽所帶的正電荷也可以通過(guò)其他氨基酸側鏈引入，例如賴(lài)氨酸（側鏈氨基）和組氨酸（側鏈咪唑基）。然而，聚精氨酸的內化表現優(yōu)于聚賴(lài)氨酸和聚組氨酸 。因此，就內化和引入機制而言，聚精氨酸也是研究最深入細胞穿透多肽。線(xiàn)性聚精氨酸的內化效率取決于序列長(cháng)度以及精氨酸殘基的數量和位置。胍基團具有與膜之間形成雙齒氫鍵的能力膜，因此其多肽內化應該與膜易位相關(guān)（圖4）。

       圖3. R8/9多肽化學(xué)結構

       圖4. 精氨酸與賴(lài)氨酸同細胞膜表面磷脂基團形成的雙齒和單齒氫鍵示意圖。

       疏水性和芳香性結構對細胞穿透肽的意義

       除了陽(yáng)離子部分，親脂性部分對細胞吸收也很重要。對此，研究者提出了一種機制，認為富含胍基的細胞穿透肽，其主鏈附近形成了疏水性的反（陰）離子，對于細胞穿透肽的內化起到作用。反離子效應首先表現為精氨酸殘基與膜組分之間的氫鍵相互作用，形成能夠穿過(guò)膜的復合物 。與此形成對比的是，富含賴(lài)氨酸的多肽中沒(méi)有觀(guān)察到這種強烈的反離子結合，這一發(fā)現反向證明了胍基反離子對于促進(jìn)細胞穿透肽內化的相關(guān)性。細胞穿透肽這種與疏水性反離子結合的特性稱(chēng)為這些肽的自激活特性。因此在關(guān)注多肽攜帶正電荷的同時(shí)，不可忽略細胞穿透肽疏水性研究，以及單一脂肪和芳香官能團的貢獻。

       疏水性可以通過(guò)添加脂肪族或芳香族結構來(lái)實(shí)現。一些細胞穿透肽模擬物的研究證實(shí)，芳香族活化性?xún)?yōu)于脂肪族。 脂化是通過(guò)將不同長(cháng)度的烴鏈（烷基）連接到已知細胞穿透肽的N端 或其它合適的官能團上。這種烷基化改性通過(guò)增強與膜的疏水相互作用提高細胞穿透肽的內化效果。除了整合脂肪鏈外，多肽分子疏水性的提高也可以通過(guò)引入疏水性氨基酸（例如亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸）來(lái)實(shí)現。有報道稱(chēng)，在使用更疏水的丁基替換甲基之后，一個(gè)細胞穿透肽的活性提升了三倍。8 與之相應的是，在同一項研究中，當 γ-dimethylsilaproline取代脯氨酸Pro構建一個(gè)具有聚脯氨酸PPII螺旋結構的細胞穿透肽 （圖5），其內化效率得到了提高。這個(gè)結果可能歸結于多肽整體疏水性增加。

       圖5. 脯氨酸與γ-dimethylsilaproline化學(xué)結構

       最近報道了一個(gè)具有細胞穿透特性的疏水性病毒肽gH 625（序列：HGLASTLTRWAHYNALIRAF，圖6）。 這種細胞穿透肽的設計來(lái)源于單純皰疹病毒I 型，用于運載脂質(zhì)體 、量子點(diǎn) 、樹(shù)枝狀大分子 、無(wú)序蛋白質(zhì) 和 SPIONS (Superparamagnetic iron oxide nanoparticles, 超順磁性氧化鐵納米粒子)。其化學(xué)結構的雙親性也得到明顯體現。

       圖6. Gh 625疏水性細胞穿透肽結構（紅色部分為疏水性氨基酸殘基）

       多肽疏水性也可以通過(guò)芳香族氨基酸殘基（色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸）的引入得以增強。根據 Wimley 和 White 的說(shuō)法，芳香族殘基在多肽插入細胞膜雙層界面的過(guò)程中具有優(yōu)勢的自由能。芘、暈苯和富勒烯被證明可以激發(fā)胍基陽(yáng)離子的活化，從而使富含精氨酸的細胞穿透肽穿越細胞膜。

       研究者又通過(guò)一系列實(shí)驗驗證，在保持多肽疏水性相同的前提下，芳香族官能團是否比脂肪族官能團提供更好的內化效率。這些研究發(fā)現，相較于脂肪鏈來(lái)說(shuō)，芳香官能團更有助于細胞穿透肽的內化。因為芳香族多肽可以同膜蛋白上的芳香氨基酸產(chǎn)生π-π 作用，它們可能有助于促進(jìn)或穩定 多肽與膜的相互作用并幫助內化。8這個(gè)概念被擴展至各種 π作用（π-π、π-陽(yáng)離子、π-陰離子 和 π-偶極）對于多肽分子內化的影響。

       陽(yáng)離子與疏水結構的綜合考慮

       在細胞滲透肽的分子設計中，陽(yáng)離子與疏水性特征需要綜合考慮。滲透素多肽（penetratin）就是這樣的例子（圖7）。滲透素是從一個(gè)果蠅同源域蛋白中得到的。滲透素與質(zhì)膜的非極性部分的非靜電相互作用對于內化很重要（這也解釋了雙親分子設計的基礎，滲透中包含亮氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等非極性氨基酸殘基）。陽(yáng)離子殘基的數量、它們在一級結構上的間距，在二級結構上的相對位置，以及包含非肽元素（例如疏水性脂質(zhì)部分）的整合，對于細胞穿透肽的分子設計非常關(guān)鍵。

       圖7. 滲透素化學(xué)結構（藍色為帶陽(yáng)離子的氨基酸殘基，紅色部分為疏水結構）

       另一個(gè)例子是 Pep-1，它包括5個(gè)色氨酸（疏水性氨基酸，以增強多肽與細胞膜的疏水性作用）和帶正電荷的富含賴(lài)氨酸的片段 (KKKRKV,來(lái)自于病毒SV-40 T-抗原上的核定位序列nuclear localization sequence), 以及一個(gè)脯氨酸間隔，以增加多肽的柔性。

       同樣，MPG肽 (GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKKKRKV) 的設計理念是包含相同的親水性核定位序列，并將該序列與HIV-gp-41病毒片段的一個(gè)疏水序列偶合所得。把陽(yáng)離子氨基酸殘基、疏水性片段，以及雙親結構以不同的方式整合在同一多肽分子中，就可以構造和衍生出更多高效的細胞穿透肽。

       半胱氨酸細胞穿透肽

       面對細胞穿透肽功能實(shí)現過(guò)程中的種種挑戰，諸如內化效率，內體逃逸效率、循環(huán)時(shí)間，以及特異性和選擇性方面（對于細胞、組織、疾病）的問(wèn)題，細胞穿透肽設計已取得了相應的進(jìn)展。其中的一個(gè)例子是富含半胱氨酸 (Cys) 的細胞穿透肽。

       該分子設計的靈感來(lái)自于在蛇毒中發(fā)現的一種毒素克羅胺 （Crotamine，圖8），它包含兩個(gè)核定位域（crot（2-18）和crot（27-39））。通過(guò)檢查crot（27-39）(序列：KMDCRWRWKCCKK)，研究者利用氨基酸殘基的系統替換和/或省略，以及深入的構效研究，設計出一種富含半胱氨酸的十肽 (CRWRWKCCKK) 分子（圖9）。這種潛在的細胞穿透肽具有增強的內化效率。

       圖8. 克羅胺Crotamine蛋白結構（圖片來(lái)源：PDB: 1H5O）

       圖9. 克羅胺Crotamine核定位片段Crot (27-39) (上圖) 與細胞穿透十肽（下圖）分子結構對比（藍色為保留部分）。

       單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)細胞穿透肽

       細胞穿透肽已成為細胞內治療劑的熱門(mén)研究領(lǐng)域。因為直鏈細胞穿透肽的天然限制，諸如內體包埋、毒 性、細胞特異性差、穩定性差和降解性強，以及不完 美的細胞滲透， 改性的細胞穿透環(huán)肽應運而生。相對于其直鏈前體，細胞穿透環(huán)肽具有增強的細胞穿透能力和改善的物化性質(zhì)，以及抵抗水解降解的穩定性。一些細胞穿透環(huán)肽可以表現出不依賴(lài)內體的攝取的特質(zhì)， 已報道了一些細胞穿透環(huán)肽具有核瞄準特性。

       圖10展示了一些具有精氨酸和其它氨基酸 殘基的單環(huán)、雙環(huán)、三環(huán)結構的細胞穿透環(huán)肽。

       圖10. 包含精氨酸與色氨酸殘基的單環(huán)、雙環(huán)、三環(huán)細胞穿透環(huán)肽的化學(xué)結構。

       [WR]4 和 [WR]5兩個(gè)細胞穿透環(huán)肽結構單元的特征表現在交替正電荷（精氨酸）與疏水性氨基酸（色氨酸）在序列中的出現。含有色氨酸和精氨酸殘基的單環(huán)細胞穿透環(huán)肽也可與潛在的治療藥物偶聯(lián)。例如，單環(huán)肽與多柔比星、紫杉醇和喜樹(shù)堿偶合， 其中多柔比星-環(huán)肽的加合物展示了內化作用的效果。

       除此之外，幾種含有半胱氨酸和精氨酸殘基的單環(huán)肽，也顯著(zhù)增強了細胞對不可滲透的磷酸肽（F')-Gly-(pTyr)-Glu-Glu-Ile (F'-GpYEEI)的吸收。含有色氨酸和組氨酸的環(huán)十肽有效增加了細胞不可滲透的磷酸肽與抗 HIV 藥物恩曲他濱（emtricitabine）的細胞內傳遞。 [WR]4-[WR]4-[WR]4 三環(huán)肽含有交替的精氨酸與色氨酸殘基，它提高了 F'-GpYEEI 和熒光標記的抗 HIV 藥物 (拉米夫定 (3TC)、恩曲他濱 (FTC) 和 siRNA) 的乳腺癌細胞系 MDA-MB-231的細胞攝取。

       在以上的細胞穿透環(huán)肽中，色氨酸和精氨酸殘基的連續排列組合，衍生出了具有不同細胞傳遞特性的不同類(lèi)型細胞穿透環(huán)肽。這些數據揭示了單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)細胞穿透肽的分子運輸潛力，并為設計下一代藥物遞送肽提供了良好的基礎。

       總結

       需要注意的是，本文在討論細胞穿透肽的分子設計時(shí)，只介紹了多肽一級結構，也就是氨基酸序列方面的影響。由于篇幅原因，暫時(shí)沒(méi)有介紹二級結構對于細胞穿透肽的活性。

       盡管目前文獻報道的細胞穿透肽的分子設計非常詳盡，但將其轉化為臨床環(huán)境仍然是一個(gè)艱巨的挑戰。細胞穿透肽的應用領(lǐng)域廣闊且在不斷發(fā)展，更深入的機理探索導致了分子設計復雜性的增加。這其中包括開(kāi)發(fā)穩定并且多域的環(huán)狀或自組裝納米結構。此外，選擇性、靶向性、高效率等方面也需要進(jìn)一步發(fā)展。許多研究人員提出了通過(guò)可控的空間折疊、環(huán)化、二聚、訂合、自組裝，甚至不同主鏈的多肽模擬物的方式，以達到提高細胞穿透肽的穩定性和活性的目的。

       然而，由于各種復雜內化機理的研究發(fā)展，疾病的異質(zhì)性，以及可用于體外研究的細胞系種類(lèi)繁多，時(shí)至今日仍然沒(méi)有統一標準，來(lái)評估一種分子設計相對于另一種設計的內化效率改進(jìn)。此外，龐大的異質(zhì)性貨物分子意味著(zhù)，在評估細胞穿透肽的效率與活性的過(guò)程中，需要考慮更多的參數。在這方面，需要標準化的統一以及更多深入對比研究，以度量不同類(lèi)型的細胞穿透肽的表現。雖然細胞穿透肽設計已經(jīng)取得了巨大的進(jìn)步，但在這一領(lǐng)域無(wú)疑仍有很廣闊的發(fā)展空間。

       參考文獻：

       [1] Pujals, S.; Fernández-Carneado, J.; Kogan, M.J.; Martinez, J.; Cavelier, F.; Giralt, E. Replacement of a proline with silaproline causes a 20-fold increase in the cellular uptake of a pro-rich peptide. J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 8479–8483.

       [2] Eiríksdóttir, E.; Konate, K.; Langel, ü.; Divita, G.; Deshayes, S. Secondary structure of cell-penetrating peptides controls membrane interaction and insertion. Biochim. Biophys. Acta, 2010, 1798, 1119–1128.

       [3] Tang, H.; Yin, L.; Kim, K.H.; Cheng, J. Helical poly(arginine) mimics with superior cell-penetrating and molecular transporting properties. Chem. Sci. 2013, 4, 3839.

       [4] Jones, A.T.; Sayers, E.J. Cell entry of cell penetrating peptides: Tales of tails wagging dogs. J. Control. Release. 2012, 161, 582–591.

       [5] L?ttig-tünnemann, G.; Prinz, M.; Hoffmann, D.; Behlke, J.; Palm-apergi, C.; Morano, I.; Herce, H.D.; Cardoso, M.C. Backbone rigidity and static presentation of guanidinium groups increases cellular uptake of arginine-rich cell-penetrating peptides. Nat. Commun. 2011, 2, 453.

       [6] Som, A.; Tezgel, A.O.; Gabriel, G.J.; Tew, G.N. Self-activation in de novo designed mimics of cell-penetrating peptides. Angew. Chem. Int. Ed. 2011, 50, 6147–6150.

       [7] Sakai, N.; Matile, S. Anion-Mediated Transfer of Polyarginine across Liquid and Bilayer Membranes. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 14348–14356.

       [8] Som, A.; Tezgel, A.O.; Gabriel, G.J.; Tew, G.N. Self-activation in de novo designed mimics of cell-penetrating peptides. Angew. Chem. Int. Ed. 2011, 50, 6147–6150.

       [9] Perret, F.; Nishihara, M.; Takeuchi, T.; Futaki, S.; Lazar, A.N.; Coleman, A.W.; Sakai, N.; Matile, S. Anionic fullerenes, calixarenes, coronenes, and pyrenes as activators of oligo/polyarginines in model membranes and live cells. J. Am. Chem. Soc. 2005, 127, 1114–1115.

       [10] Galdiero, S.; Falanga, A.; Vitiello, M.; Browne, H.; Pedone, C.; Galdiero, M. Fusogenic domains in herpes simplex virus type 1 glycoprotein H. J. Biol. Chem. 2005, 280, 28632–28643.

       [11] Wimley, W.C.; White, S.H. Experimentally determined hydrophobicity scale for proteins at membrane interfaces. Nature, 1996, 3, 842–848.

       [12] Perret, F.; Nishihara, M.; Takeuchi, T.; Futaki, S.; Lazar, A.N.; Coleman, A.W.; Sakai, N.; Matile, S. Anionic fullerenes, calixarenes, coronenes, and pyrenes as activators of oligo/polyarginines in model membranes and live cells. J. Am. Chem. Soc. 2005, 127, 1114–1115.

       [13] (a) Canine, B.F.; Wang, Y.; Hatefi, A. Evaluation of the effect of vector architecture on DNA condensation and gene transfer efficiency. J. Control. Release, 2008, 129, 117–123; (b) Marshall, N.B.; Oda, S.K.; London, C.A.; Moulton, H.M.; Iversen, P.L.; Kerkvliet, N.I. and Mourich, D.V. Arginine-rich cellpenetrating peptides facilitate delivery of antisense oligomers into murine leukocytes and alter pre-mRNA splicing. J. Immunol. Methods, 2007, 325, 114–126; (c) Rothbard, J.B.; Kreider, E.; VanDeusen, C.L.;Wright, L.;Wylie, B.;Wender, P.A. Arginine-rich molecular transporters for drug delivery: Role of backbone spacing in cellular uptake. J. Med. Chem. 2002, 45, 3612–3618; (d) Siprashvili, Z.; Scholl, F.A.; Oliver, S.F.; Adams, A.; Contag, C.H.; Wender, P.A.; Khavari, P.A. Gene transfer via reversible plasmid condensation with cysteine-flanked, internally spaced arginine-rich peptides. Hum. Gene Ther. 2004, 14, 1225–1233; (e) Futaki, S.; Ohashi,W.; Suzuki, T.; Niwa, M.; Tanaka, S.; Ueda, K.; Harashima, H.; Sugiura, Y. Stearylated arginine-rich peptides: A new class of transfection systems. Bioconjug. Chem. 2001, 12, 1005–1011.

       [14] Jha, D.; Mishra, R.; Gottschalk, S.; Wiesm, K.; Ugurbil, K.; Maier, M.E. CyLoP-1: A Novel Cysteine-Rich Cell-Penetrating Peptide for Cytosolic Delivery of Cargoes. Bioconj. Chem. 2011, 22, 319–328.

       [15] Mandal, D.; Nasrolahi Shirazi, A.; Parang, K. Cell-penetrating homochiral cyclic peptides as nuclear-targeting molecular transporters. Angew. Chem. Int. Ed. 2011, 50, 9633–9637.

       [16] (a) Darwish, S.; Sadeghiani, N.; Fong, S.; Mozaffari, S.; Hamidi, P.; Withana, T.; Yang, S.; Tiwari, R.K.; Parang, K. Synthesis and antiproliferative activities of doxorubicin thiol conjugates and doxorubicin-SS-cyclic peptide. Eur. J. Med. Chem. 2019, 161, 594–606; (b) El-Sayed, N.S.; Shirazi, A.N.; Sajid, M.I.; Park, S.E.; Parang, K.; Tiwari, R.K. Synthesis and antiproliferative activities of conjugates of paclitaxel and camptothecin with a cyclic cell-penetrating peptide. Molecules, 2019, 24, 1427.

       [17] Shirazi, A.N.; El-Sayed, N.S.; Mandal, D.; Tiwari, R.K.; Tavakoli, K.; Etesham, M.; Parang, K. Cysteine and arginine-rich peptides as molecular carriers. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2016, 26, 656–661.

       [18] Shirazi, A.; Mozaffari, S.; Sherpa, R.; Tiwari, R.; Parang, K. Efficient intracellular delivery of cell-impermeable cargo molecules by peptides containing tryptophan and histidine. Molecules, 2018, 23, 1536–1548.

       [19] Kumar, S.; Mandal, D.; El-Mowafi, S.A.; Mozaffari, S.; Tiwari, R.K.; Parang, K. Click-free synthesis of a multivalent tricyclic peptide as a molecular transporter. Pharmaceutics, 2020, 12, 842–859.

       [20] Daniela Kalafatovic, Ernest Giralt. Cell-Penetrating Peptides: Design Strategies beyond

       Primary Structure and Amphipathicity. Molecules. 2017, 22, 1929.