說(shuō)到治療癌癥的細胞療法，我們首先想到的可能是CAR-T細胞療法和TCR細胞療法。兩款CAR-T細胞療法已經(jīng)獲得FDA批準上市，它們在治療白血病方面已經(jīng)取得了出色的療效。然而，在治療實(shí)體瘤方面，CAR-T和TCR細胞療法取得的進(jìn)展卻非常有限。在今年的ASCO年會(huì )上，一種已經(jīng)有30年歷史的細胞療法卻異軍突起，在治療黑色素瘤和宮頸癌患者的臨床試驗上獲得了出色的結果。這就是Iovance Biotherapeutics公司的腫瘤浸潤淋巴細胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）療法。隨著(zhù)這一突破性進(jìn)展的出現，對TIL療法的關(guān)注也與日俱增。今天藥明康德內容團隊將與讀者介紹TIL療法的前世、今生和未來(lái)。

       腫瘤浸潤淋巴細胞，在“前線(xiàn)”與癌細胞作戰的“士兵”

       腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）是離開(kāi)血液循環(huán)，遷移到腫瘤附近的淋巴細胞，它們包括T細胞，B細胞。如果把人體免疫系統對癌癥的反應比作一場(chǎng)戰爭，TIL是從身體各處奔往前線(xiàn)，與癌細胞作戰的“戰士”。它們可以起到殺傷癌細胞的作用。腫瘤中TIL的多少是預測癌癥患者預后和對免疫療法反應的重要指標。

       然而，雖然TIL出現在腫瘤的微環(huán)境中，卻不意味著(zhù)癌細胞就可以被消滅。很多時(shí)候，在腫瘤中出現的TIL太少，并且被腫瘤微環(huán)境中的多種因素抑制了殺傷癌細胞的能力。沿用戰爭的比喻，這些到達前線(xiàn)的戰士，有的被敵人“招安”（受到PD-L1或免疫抑制細胞的抑制），還有的已經(jīng)戰斗了太久，遍體鱗傷沒(méi)有什么戰斗力（T細胞耗竭）。

       歷史“悠久”的TIL療法

       既然這些“戰士”具有和癌細胞作戰的能力，那么我們能不能想個(gè)辦法讓它們重新煥發(fā)青春，提高它們的數目，增強它們的戰斗力呢？這是美國國家癌癥研究所（NCI）的Steven Rosenberg博士和他的同事們想要解決的問(wèn)題。說(shuō)到TIL療法，就需要提到Steven Rosenberg博士，早在1988年，他作為第一作者，就在《新英格蘭醫學(xué)雜志》上發(fā)表研究，表明使用從轉移性黑色素瘤組織中分離，在體外通過(guò)IL-2刺激培養并增殖的TIL，在注回患者體內后能夠為60%的患者帶來(lái)緩解。

       Rosenberg博士是TIL療法的先驅。他和同事的研究開(kāi)創(chuàng )了使用IL-2刺激TIL，促進(jìn)TIL細胞增殖的培養方法。時(shí)至今日，Rosenberg博士領(lǐng)導的團隊還在進(jìn)行TIL療法的臨床試驗，力圖擴展TIL療法的應用范圍。

       雖然與CAR-T和TCR療法相比，TIL療法的歷史“悠久”，然而歷史上，它的應用一直面臨著(zhù)兩大難題：1，將從患者的腫瘤組織中分離的TIL進(jìn)行擴增和激活是一個(gè)費時(shí)費力的大工程。2，TIL療法對黑色素瘤雖然效果顯著(zhù)，但是在治療其它類(lèi)型癌癥時(shí)的效果卻不明顯。近年來(lái)，在研發(fā)人員的不斷努力下，這兩重障礙正在被突破。

       TIL療法的制造過(guò)程和它的優(yōu)勢

       TIL療法與CAR-T和TCR細胞療法的區別在于，T細胞不需要經(jīng)過(guò)基因工程的改造。TIL療法的基本步驟是：研究人員從患者體內取出新鮮腫瘤組織，在體外將它們打散，在細胞培養環(huán)境下通過(guò)使用生長(cháng)因子（通常為IL-2和CD3受體激動(dòng)劑）來(lái)刺激T細胞的增殖。T細胞的擴增過(guò)程通常需要5-6周的時(shí)間，可以將T細胞的數目增加到500億個(gè)。

       在將TIL輸回患者體內之前，患者通常需要接受清除淋巴細胞的化療（lymphodepleting chemotherapy）。這一步驟可以削弱身體中已有的淋巴細胞對促進(jìn)T細胞生長(cháng)的生長(cháng)因子的競爭，并且清除其它抑制T細胞功能的細胞，比如調節性T細胞（Treg）和髓源性抑制細胞（MDSc）。它可以幫助輸回體內的TIL細胞在體內定植和發(fā)揮功能。輸回患者體內的TIL細胞可以存活很長(cháng)時(shí)間，MD安德森癌癥中心（MD Anderson Cancer Center）的研究表明，在輸回患者體內5年之后，仍然有大量TIL存留在患者體內。多年來(lái)的研究已經(jīng)大幅度提高了從腫瘤組織中收集和擴增TIL的技術(shù)。目前NCI和Iovance公司匯報他們能夠在超過(guò)90%攜帶大腫瘤（bulky tumor）的患者中成功收集TILs。

       與CAR-T和TCR細胞療法相比，TIL療法存在著(zhù)一系列優(yōu)勢。首先，TIL療法由靶向癌細胞中多種抗原的T細胞組成，因此可以通過(guò)多個(gè)靶點(diǎn)激發(fā)對癌細胞的細胞**反應。而CAR-T和TCR細胞療法通常只能靶向一個(gè)抗原，這讓癌細胞可能更容易對它們產(chǎn)生抗性。目前，TCR和CAR-T療法在治療實(shí)體瘤方面進(jìn)展有限，而TIL療法已經(jīng)在多種癌癥類(lèi)型中產(chǎn)生了可喜的療效。由于TIL療法使用的細胞是遷移到腫瘤中的天然TIL細胞，研究人員目前還未觀(guān)察到它們的脫靶效應和激發(fā)細胞因子釋放綜合征的能力。它可能避免困擾TCR和CAR-T細胞療法的毒副作用。

       在研TIL療法

       目前，多家學(xué)術(shù)機構和生物技術(shù)公司在開(kāi)發(fā)TIL療法。其中包括Iovance公司，由MD安德森癌癥中心和Berkeley Lights聯(lián)合創(chuàng )建的Optera Therapeutics公司，TILT Biotherapeutics公司等等。Iovance公司的TIL療法的臨床進(jìn)度最快，在今年ASCO年會(huì )上，該公司開(kāi)發(fā)的lifileucil（LN-144）和LN-145分別在治療黑色素瘤和宮頸癌患者的臨床試驗中表現出優(yōu)異的療效。Lifileucil在接受過(guò)多種療法治療的轉移性黑色素瘤患者中，達到38%的客觀(guān)緩解率和80%的疾病控制率。這些患者中很多已經(jīng)接受過(guò)PD-1抑制劑治療。該公司開(kāi)發(fā)的LN-145療法獲得了FDA授予的突破性療法認定，在治療宮頸癌患者時(shí)達到44%的緩解率和11%的完全緩解率。該公司計劃在2020年遞交lifileucil和LN-145的生物制劑許可申請（BLA）。

       而NCI的Stephanie L Goff博士在今年的ASCO年會(huì )上也匯報了NCI進(jìn)行的TIL臨床試驗的結果。試驗結果表明，從轉移性黑色素瘤患者中獲取的TIL，能夠達到23.7%的完全緩解率。而且其中很多患者已經(jīng)無(wú)癌超過(guò)5年時(shí)間。

       “TIL療法有能力消滅最后一個(gè)癌細胞，“她說(shuō)。

       她和Rosenberg的研究團隊在使用TIL治療其它類(lèi)型癌癥方面也取得了突破，在A(yíng)SCO年會(huì )上，她匯報了一名乳腺癌患者，在接受TIL治療后達到完全緩解的例子。

       TIL療法的局限和未來(lái)

       雖然TIL療法在近年來(lái)取得了長(cháng)足的進(jìn)步，然而，生成足夠的TIL細胞仍然是研發(fā)人員需要面對的挑戰。“（基于我現在的理解）TIL療法要產(chǎn)生療效，需要生成比CAR-T療法多100倍的細胞，大概需要300-500億個(gè)細胞，“Goff博士表示：”冰凍冷藏這么多細胞，然后在解凍過(guò)程中維持它們的活性是一個(gè)重大挑戰。“ 而且，生成這么多細胞需要時(shí)間，對于病重的患者來(lái)說(shuō)，他們可能無(wú)法等那么久。Iovance公司的生產(chǎn)工藝目前能夠在22天內完成TIL療法的生產(chǎn)。業(yè)界人士認為，TIL細胞的生產(chǎn)時(shí)間需要壓縮到1個(gè)月以下，才能在大部分患者中使用。

       在黑色素瘤和宮頸癌之外，TIL療法對其它癌癥類(lèi)型的成功率并不高。這可能是因為像乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌等癌癥種類(lèi)的免疫原性不強，從患者腫瘤組織中收集的TILs中，能夠殺傷癌細胞的部分很少，因此即便擴增了很多倍，輸入到患者體內的TILs還是不能有效對腫瘤發(fā)其攻擊。

       Rosenberg的研究團隊解決這一難題的方法是對TIL進(jìn)行篩選，它們通過(guò)對腫瘤進(jìn)行基因組測序，發(fā)現產(chǎn)生新抗原的基因序列，然后將這些表達新抗原的基因序列導入到抗體呈現細胞（APC）中。然后，用這些表達患者新抗原的抗體呈現細胞對從患者體內獲得的T細胞進(jìn)行篩選，將對新抗原產(chǎn)生反應的T細胞進(jìn)行擴增并輸回患者體內。這一策略讓TIL療法能夠在從上皮組織中生成的癌癥類(lèi)型中（epithelial cancers）達到15%的緩解率。

       然而，這一進(jìn)一步篩選的過(guò)程又延長(cháng)了療法生產(chǎn)的時(shí)間，目前這一新抗原TIL療法的生產(chǎn)時(shí)間長(cháng)達10周，對于很多癌癥患者來(lái)說(shuō)，這太慢了！

       今年一月成立的Myst Therapeutics公司是致力于解決這一問(wèn)題的生物技術(shù)公司之一。該公司的創(chuàng )始人Timothy Langer先生曾經(jīng)在Kite Pharma公司任職，開(kāi)發(fā)CAR-T療法Yescarta和靶向新抗原的TCR療法產(chǎn)品。在他看來(lái)，4-5年前，CAR-T療法的制造過(guò)程也曾經(jīng)被認為是很難解決的挑戰。他說(shuō)，有了開(kāi)發(fā)CAR-T產(chǎn)品的經(jīng)驗，他覺(jué)得縮短TIL療法的生產(chǎn)時(shí)間是一個(gè)執行層面上的問(wèn)題。

       TIL治愈癌癥的潛力正在吸引更多的公司和研究機構投身到這一領(lǐng)域。在NCI的臨床試驗中達到完全緩解的46名黑色素瘤患者中，只有兩名患者出現復發(fā)。誠然，TIL療法在黑色素瘤以外的癌癥類(lèi)型中的表現，將決定它的治療潛力。我們期待研發(fā)人員的不斷努力，TIL療法能夠為更多類(lèi)型的癌癥患者造福。