適應性進(jìn)化技術(shù)是目前備受矚目的菌種改良技術(shù),該技術(shù)能夠有效的增強菌株的某種表型或者生理性狀,并且該育種技術(shù)會(huì )保留菌株原有的優(yōu)良性狀,不會(huì )出現基因工程育種技術(shù)造成的生長(cháng)限制。
為了探究控制谷氨酸棒桿菌的生長(cháng)和碳水化合物代謝的關(guān)鍵調控因子,研究人員在葡萄糖的基礎培養基中對野生型的谷氨酸棒桿菌(C. glutamicum ATCC 13032)進(jìn)行了長(cháng)達1500代的適應性進(jìn)化。在馴化菌株中分離獲得了一株優(yōu)良菌株G15H,該菌株的生長(cháng)速率比野生型菌株提高了42%,是迄今為止報道的水平(0.62 h-1)。
為了考察G15H菌株與野生型菌株在基因水平上的表達差異,研究者對其進(jìn)行了全基因組測序。結果表明在不同時(shí)期的馴化菌株中,多個(gè)基因發(fā)生了變化。其中,在轉錄因子GntR1表達中,70位的賴(lài)氨酸替換成了谷氨酸。在轉錄因子RamA表達中色氨酸替換了52位的丙氨酸。為了考察關(guān)鍵基因的變化對谷氨酸棒桿菌的影響,研究者將這種關(guān)鍵突變人為的移植到野生型菌株中,結果只有ramA的突變株產(chǎn)生變化,在生長(cháng)速率上提高了20%。在敲除GGPS的基礎下,ramA突變株和gntR1突變株的生長(cháng)都得到了明顯的改善,并且這兩個(gè)效果是相加的。因此研究者同時(shí)敲入這兩個(gè)突變基因,結果發(fā)現獲得的菌株DKI的生長(cháng)速率達到了馴化菌株的水平(0.62 h-1)。
但是進(jìn)一步研究發(fā)現,谷氨酸棒桿菌的生長(cháng)改善并不是因為ramA和gntR1基因的失活導致的。為了考察這個(gè)現象,研究者從整個(gè)中心碳代謝上尋找關(guān)鍵信息,結果發(fā)現馴化菌株G15H和DKI菌株的磷酸戊糖代謝途徑的基因都被明顯上調,其中編碼葡萄糖酸通透酶(gntP)及葡萄糖酸激酶(gntK)的基因被分別上調了9倍和20倍。此外,發(fā)現G15H和DKI菌株的ATP/ADP的比值比野生菌株提高了25%。
有趣的是,獲得的菌株G15H和DKI不僅在葡萄糖培養基中具有高是生長(cháng)速率,在果糖,木糖和蔗糖中也表現了較好的生長(cháng)性能。并且該菌株還可以改善靜息細胞在厭氧條件下是生長(cháng)性能,糖耗速率能達到30%。該成果近期發(fā)表在雜志《Metabolic Engineering》上。
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