All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase) 是一款高效、便捷、減少污染的高質(zhì)量一鏈 cDNA 合成試劑盒，包含熱穩(wěn)定的 M-MLV GIII Reverse Transcriptase 及其反應(yīng) Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)??VN 和隨機(jī)引物等一鏈 cDNA 合成所需的所有組分，僅需加入 RNA 模板和水即可開始反應(yīng)。使用該逆轉(zhuǎn)錄試劑盒獲得的 cDNA 主要用于下游 qPCR 實(shí)驗(yàn)。
從細(xì)胞中提取的 RNA 往往存在基因組 DNA 污染，如果逆轉(zhuǎn)錄前不將其去除，下游 qPCR 反應(yīng)時(shí)基因組 DNA 與 cDNA 會(huì)同時(shí)被擴(kuò)增（尤其當(dāng)引物設(shè)計(jì)在同一外顯子上時(shí)），從而影響基因表達(dá)定量準(zhǔn)確性。本試劑盒采用 dsDNase 高效去除基因組 DNA 污染，dsDNase 能夠特異性消化雙鏈 DNA（dsDNA 或 DNA-RNA 雜合鏈中的 DNA 鏈）， 并且具有熱敏感性，在逆轉(zhuǎn)錄溫度下即可快速不可逆地失活。與傳統(tǒng) 使用 DNase I 去除基因組 DNA 污染的方法相比，dsDNase 無需額外加入 EDTA 進(jìn)行失活，不僅節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，而且降低了對逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的抑制。
可依據(jù)基因組污染嚴(yán)重程度選擇采用去基因組 DNA 污染與逆轉(zhuǎn)錄分開進(jìn)行的操作方法，或者去基因組污染與逆轉(zhuǎn)錄一步法進(jìn)行的操作方法。
| 組分 | 規(guī)格 |
| All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix | 400 μl |
| dsDNase | 2×50 μl |
| 10× dsDNase Buffer | 200 μl |
| Nuclease-Free Water | 2×1 ml |
-20℃保存
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